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目录编号:IQ402

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数据表主要描述:Mouse Anti -Progesterone 11 alpha [45/23] 目标抗原:Progesterone 11 alpha 目录编号:IQ402 数量:0.2mg 浓度:0.9mg/mlClone:45/23Host:MouseIsotype:IgG1Myeloma/Fusion Partners:NS0Immunogen:Progesterone 11-alpha-BSA; C21 交叉反应:17a-OH 孕酮 物种反应性:人类纯化:蛋白 G 亲和层析 格式:含有 PBS + 10mM 叠氮化钠的纯化抗体应用:ELISA、RIA 稀释:最佳抗体稀释应由用户实验室确定,因为它可能取决于ELISA 中使用的检测系统 也称为:黄体黄体激素抗体;脂质黄体素抗体;黄体激素抗体;孕激素抗体 方案免疫荧光方案 - 甲醛固定从 T.c.unit 收集细胞并使用抽吸从培养皿中去除培养基。用 1x PBS 清洗并去除。孵育细胞在预热 (37°C) 多聚甲醛中在轨道振荡器上室温孵育 12 分钟。去除 PFA 并在室温下在 0.5% Triton X-100 的 1x PBS 中孵育 5 分钟。准备封闭试剂,这也是抗体稀释剂。用 1 洗涤细胞 2 次x PBS 在室温下,4 分钟/在定轨摇床上洗涤。在室温下用 1% NCS 和 1x PBS 封闭 30 分钟。准备一抗(50 升/盖玻片)和湿染色室。用 2x 洗涤细胞室温下的 lx PBS 并短暂风干。在染色室中于黑暗中在室温下与一抗孵育 1 小时。在此期间准备二抗。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次(更换烧杯 5 次/每个烧杯计数 5 次)在染色室中于室温下在黑暗中用二抗孵育 1 小时。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次。Mount在 Dapi 中。

溶液(在染色当天新鲜制备)。

* 1x 磷酸盐缓冲盐水。*封闭试剂:1% NCS 溶于 1x PBS(使用新鲜的 10x PBS)。*固定溶液:3.5%多聚甲醛。

1.75g PFA 溶于 20ml d.H2O 加 5 滴 1M NaOH。在 50-60°C 的热板上搅拌直至溶解。添加 4 滴 IN HCI 并检查 pH 指示剂条。 PH 应为 7.4。带 d.H20 t 的完整体积o 25ml 并加入 25ml 2xPBS。在添加到盖玻片之前检查 pH 值。

免疫荧光协议 - 甲醇/丙酮固定从 T.C.unit 收集细胞并使用抽吸从培养皿中去除培养基。用 1x PBS 清洗并取出。用冷甲醇:丙酮 1:1 冰上固定细胞 10 分钟。准备封闭试剂,这也是抗体的稀释剂。去除固定剂并在室温下用 1x PBS 洗涤细胞 3 次,每次 4 分钟/在轨道摇床上洗涤。在室温下用 1% NCS 和 1x PBS 封闭 30 分钟。准备一抗(50 升/盖玻片)和潮湿的染色室。在室温下用 1 x PBS 清洗细胞 2 次,然后风干约 7 分钟。在染色室的黑暗中室温下与一抗孵育 1 小时。在此期间准备二抗。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次(更换 5 次烧杯/每个烧杯计数 5 次)在染色室的黑暗中,在室温下用二抗孵育 1 小时。用 1x PBS 清洗细胞 5 次。在 Dapi 中安装。

解决方案(准备新鲜染色同一天)

* 1x 磷酸盐缓冲盐水。*封闭剂:1% NCS 溶于 1x PBS(使用新鲜的 10x PBS)。*固定溶液:甲醇:丙酮 1:1 冰冷。Western Blotting Protocol Transfer凝胶到 PDVF 或硝酸纤维素膜 将膜放入塑料托盘中,在封闭缓冲液中搅拌 1 小时 在洗涤缓冲液中漂洗 在洗涤缓冲液加一抗中孵育 1 小时 用洗涤缓冲液洗涤 6 X 5 分钟 在洗涤缓冲液加二抗中孵育 1 小时小时 用洗涤缓冲液洗涤 6 次 5 分钟检测(例如 ECL、Amersham,根据制造商说明)洗涤缓冲液

PBS + 0.1% Tween 20

封闭缓冲液

洗涤缓冲液 + 5% 奶粉

所用抗体的浓度取决于每种抗体、抗原的量和所用的检测方法。稀释度一般在几百倍到几千倍稀释之间,但通常要凭经验确定。

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通过网站订购

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